आणविक जीव विज्ञान में, अच्छा बफर विकल्प और विभिन्न डीएनए अलगाव चरणों के लिए तैयारी प्रोटीन अभिव्यक्ति पर आगे बढ़ने या शुरू करने के लिए एक और मैक्सी-प्रीप किट खोलने के बीच का अंतर हो सकता है। उनके महत्वपूर्ण महत्व के बावजूद, बफ़र व्यंजनों अक्सर बस है कि विभिन्न घटकों के लिए स्पष्टीकरण या तर्क के बिना लिखे गए व्यंजनों। ऐसा ही एक बफर ग्लूकोज-ट्रिस-ईडीटीए या जीटीई बफर है।
$config[code] not foundGTE का उपयोग किस लिए किया जाता है?
जीटीई का उपयोग बैक्टीरिया के सेल छर्रों को फिर से भेजने से पहले किया जाता है (कोशिकाओं को खोलना) और अंदर प्लास्मिड डीएनए की कटाई करना। कोशिका झिल्ली को नरम करने वाले Lysozyme को अक्सर GTE बफर के साथ जोड़ा जाता है। इस चरण के दौरान संपूर्ण कोशिकाओं के एक समरूप निलंबन को प्राप्त करना ताकि बाद में जोड़ा गया लसीका समाधान सभी कोशिकाओं को मिल सके, अच्छा डीएनए पैदावार प्राप्त करना महत्वपूर्ण है। डीएनए के लिए एक स्थिर वातावरण प्रदान करते हुए जीटीई को ऐसा करने के लिए डिज़ाइन किया गया है।
ऑस्मोलरिटी के लिए ग्लूकोज
50mM (मिलिमोलर) ग्लूकोज चीनी को परासरण को बनाए रखने के लिए GTE बफर में जोड़ा जाता है जहां कोशिकाओं के बाहर घुला हुआ सांद्रण कोशिकाओं के अंदर होता है। यह समय से पहले सेल लसीका को रोकता है, जो एकत्रीकरण और गिरावट के कारण कम डीएनए पैदावार का कारण बन सकता है। बफर के अन्य घटक भी समाधान के परासरण में योगदान करते हैं, लेकिन ग्लूकोज, गैर-इलेक्ट्रोलाइट होने के नाते, एक अच्छा विकल्प है क्योंकि यह समाधान के बफर गुणों में हस्तक्षेप नहीं करता है।
पीएच स्थिरता के लिए ट्रिस
Tris, Tris (hydroxymethyl) एमिनोमिथेन का संक्षिप्त नाम है, जो एक बहुत ही सामान्य pH बफर है। जीटीई बफर के मामले में, एसिड नमक (ट्रिस-एचसीएल) बफर को 25mM की एकाग्रता में जोड़ा जाता है। यह पास-फिजियोलॉजिकल 8.0 पर समाधान के पीएच को बनाए रखता है, जो प्लास्मिड डीएनए के एसिड हाइड्रोलिसिस (गिरावट) को रोकने के लिए एक आदर्श पीएच है और अन्य सेल घटकों के अवांछित पक्ष प्रतिक्रियाएं हैं।
EDTA डीएनए में गिरावट को रोकता है
EDTA, या ethylenediaminetetraacetic एसिड, समाधान से बाहर धातु के आयनों को पकड़ता है या "chelates", उन्हें अवांछित पक्ष प्रतिक्रियाओं में भाग लेने से रोकता है। जीटीई बफर में, EDTA 10mM में जोड़ा जाता है। इसका प्राथमिक उद्देश्य मुफ्त जस्ता, मैग्नीशियम और कैल्शियम को गोल करने के लिए बफर में है, जिससे कुछ मार्गों द्वारा डीएनए में गिरावट को रोका जा सकता है जो उन धातुओं की आवश्यकता होती है।
कुछ महत्वपूर्ण टिप्स
अपने जीटीई बफर को ठंडा रखें और इसे कम मात्रा में बनाएं ताकि उसमें अनजाने बैक्टीरिया न पनप सकें। चीनी और नियंत्रित पीएच एक महान विकास माध्यम के लिए बनाते हैं। हमेशा शुद्ध पानी का उपयोग करें। नल के पानी में पाइप से धातु के आयनों की अधिकता हो सकती है, जो कैप्चर करने की EDTA की क्षमता को अभिभूत कर सकती है। यदि आपको अपने नमूने में आरएनए को दखल देने की उपस्थिति पर संदेह है, तो समस्या को खत्म करने के लिए अपने जीटीई बफर में 100 माइक्रोग्राम प्रति मिलीलीटर पर RNase A जोड़ें।
